梅毒螺旋體抗體診斷試劑(凝集法)

使用說(shuō)明書(shū)

[通用名稱(chēng)]梅毒螺旋體抗體診斷試劑(凝集法)

[商品名稱(chēng)]賽樂(lè)迪亞

[包裝規(guī)格]100人份/盒(20人份×5)；

[預(yù)期用途]本品用于檢測(cè)出血清和血漿中的梅毒螺旋體Treponema(TP)抗體及測(cè)定其抗體效價(jià)。

[檢測(cè)原理]

賽樂(lè)迪亞TP.PA是將梅毒Treponema Pallidum(Nichols株)的精制菌體成分包被在人工載體明膠粒上。這種致敏粒子和樣品中的梅毒螺旋體Treponema Pallidum(TP)抗體進(jìn)行反應(yīng)發(fā)生凝集，產(chǎn)生粒子凝集反應(yīng)(Particle Agglutination Test；PA法)，由此可以檢測(cè)出血清和血漿中的梅毒螺旋體Treponema Pallidum(TP)抗體，并且可用來(lái)測(cè)定抗體效價(jià)。

[主要組成成分] 本試劑盒是由下述試劑和附帶器具組成。

注)進(jìn)行定性試驗(yàn)時(shí)的樣品數(shù)

A：溶解液(液狀)

   用于調(diào)制致敏粒子和未致敏粒子。

B：血清稀釋液(液狀)

   用于樣品的稀釋。

C：致敏粒子(冷凍干燥)

   調(diào)制濃度為1%的Treponema Pallidum(Nichols株)致敏明膠粒子。

D：未致敏粒子(冷凍干燥)

   經(jīng)單寧酸處理調(diào)制濃度為1%的明膠粒子。

E：陽(yáng)性對(duì)照血清(液狀)

   用抗Treponema Pallidum(Nichols株)家兔免疫血清調(diào)制成抗體效價(jià)為1：320(最終稀釋倍數(shù))。

附帶器具

滴管    25/ul    2支

該滴管只用于致敏粒子和未致敏粒子的滴入,請(qǐng)不要作為其他使用。

[儲(chǔ)存條件及有效期]

2-10℃下保存。有效期為12個(gè)月。

[適用器具]

使用本試劑時(shí)，請(qǐng)準(zhǔn)備好以下器具。

 微量反應(yīng)板  U型

 微量加樣器  25ul(0.025mL)

 微量滴管    25ul(0.025mL)

 移液管     微量移液管和刻度滴管

滴管

平板混合器

判定用觀測(cè)板

[樣本要求]

1．樣品中如果存在紅細(xì)胞等其他有形成分，會(huì)給反應(yīng)帶來(lái)不便，所以應(yīng)在離心除去之后再進(jìn)行檢查。

2．血清樣品即使鈍化也不會(huì)影響檢查結(jié)果。

[檢驗(yàn)方法]

  如果利用自動(dòng)分析測(cè)定裝置來(lái)使用本試劑時(shí)，請(qǐng)按照儀器的使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。以下所述是手工操作方法，請(qǐng)連貫地進(jìn)行操作。

試劑的調(diào)制

A：溶解液(液狀)

按照測(cè)定操作規(guī)則使用。

B：血清稀釋液(液狀)

按照測(cè)定操作規(guī)則使用。

C：致敏粒子(冷凍干燥)

加入一定量的溶解液進(jìn)行調(diào)制。

請(qǐng)?jiān)谑褂们?/span>30分鐘于室溫(15-30℃)下進(jìn)行調(diào)制。

D：未致敏粒子(冷凍干燥)

加入一定量的溶解液進(jìn)行調(diào)制。

請(qǐng)?jiān)谑褂们?/span>30分鐘于室溫(15-30℃)下進(jìn)行調(diào)制。

E：陽(yáng)性對(duì)照血清(液狀)

按照測(cè)定操作規(guī)則使用。

1．方法1(參照表1)

1)用微量滴管將血清稀釋液滴入微量反應(yīng)板第1孔中(100ul)，從第2孔至第4孔各滴1滴(25ul)。

2)用微量移液管取樣品25／／L至第l孔中。然后用微量加樣器或微量移液管以2ⁿ的方式從第1孔稀釋至第4孔。

3)用試劑盒中提供的滴管在第3孔中滴／Xl滴(25／JL)未致敏粒子，在第4孔中滴入1滴(25ul)致敏粒子。

4)用平板混合器以不會(huì)導(dǎo)致微量反應(yīng)板內(nèi)容物濺出的強(qiáng)度混合30秒鐘，加蓋后于室溫(15～30℃)下水平靜置。2小時(shí)后，在觀察鏡上記錄并觀察其反應(yīng)圖像，或者利用免疫稀釋判定裝置進(jìn)行測(cè)定。另外，即使靜置至次日也不影響判定結(jié)果。

                    表1

在方法1中判定為陽(yáng)性的樣品，請(qǐng)?jiān)儆镁哂写_定意義的方法2進(jìn)行檢測(cè)。

方法2(參照表2)

1)用微量滴管將血清稀釋液滴入微量反應(yīng)板第1孔中，共計(jì)4滴(100ul)，從第2孔至最后一孔各滴入1滴(25ul)。

2)用微量移液管取樣品25ul至第l孔中。然后用微量加樣器或微量移液管以2ⁿ的方式從第1孔稀釋至最后一孔。

3)用試劑盒中提供的滴管在第3孔中滴入1滴(25ul)未致敏粒子，從第4孔至最后一孔各滴入1滴(25ul)致敏粒子。

4)用平板混合器以不會(huì)導(dǎo)致微量反應(yīng)板內(nèi)容物濺出的強(qiáng)度混合30秒鐘，加蓋后于室溫(15-30℃)下水平靜置。2小時(shí)后，在觀察鏡上記錄并觀察其反應(yīng)圖像，或者利用免疫稀釋判定裝置進(jìn)行測(cè)定。另外，即使靜置至次日也不會(huì)影響其判定結(jié)果。

                          表2

3.對(duì)照試驗(yàn)

1)能夠確認(rèn)每例樣品未致敏粒子的反應(yīng)(最終稀釋倍數(shù)1：40)均是(-)。

2)能夠確認(rèn)每次檢查中血清稀釋液和致敏粒子以及未致敏粒子的反應(yīng)均是(-)(介質(zhì)對(duì)照)。

3)每個(gè)試劑盒中的陽(yáng)性對(duì)照血清都要與樣品用相同的測(cè)定方法進(jìn)行試驗(yàn)。陽(yáng)性對(duì)照血清調(diào)制成抗體效價(jià)為1：320(最終稀釋倍數(shù))。

4.吸收操作

對(duì)于未致敏粒子和致敏粒子均顯示(±)以上凝集的樣品要按照下列順序在完成吸收操作的基礎(chǔ)上進(jìn)行再試驗(yàn)。

1)取用定量的溶解液調(diào)制好的未致敏粒子0.95mL至小試管中。

2)加入樣品50ul混合，于室溫(15～30℃)下放置20分鐘以上。

3)離心分離(2,000rpm  5分鐘)，然后分取上清液[吸收完畢的稀釋樣品(1：20)]50ul至反應(yīng)板第3孔中，特別注意不要混入粒子。

4)從第4孔以后，要預(yù)先各滴A25ul血清稀釋液，從第3孔至最后一孔用微量加樣器或微量移液管以2ⁿ的方式進(jìn)行稀釋。

5)以后就與[檢驗(yàn)方法](2-3)以后同樣的操作進(jìn)行判定。通常情況可以用上述的吸收操作吸收*，但如果吸收不凈時(shí)，請(qǐng)使用其他的檢查方法。

[結(jié)果的判定方法]

1．反應(yīng)圖像的判定

在判定用觀測(cè)板上靜置微量反應(yīng)板, 觀察粒子的反應(yīng)圖像。將反應(yīng)圖像與介質(zhì)對(duì)照的圖像進(jìn)行比較并參照表3進(jìn)行判斷。

                  表3

2. 判定基準(zhǔn)

陽(yáng)性：

未致敏粒子(最終稀釋倍數(shù)1：40)的反應(yīng)圖像判定為(-)，

致敏粒子(最終稀釋倍數(shù)1：80以上)的反應(yīng)圖像判定為(+)時(shí)，最終判定為陽(yáng)性，進(jìn)行方法2的測(cè)定時(shí)，將顯示出反應(yīng)圖像為(+)時(shí)的最終稀釋倍數(shù)作為抗體效價(jià)。

陰性：

無(wú)論未致敏粒子呈現(xiàn)何種反應(yīng)圖像，只要致敏粒子(最終稀釋倍數(shù)1：80)的反應(yīng)圖像顯示為(-)時(shí)，最終判定即為陰性。

保留：

未致敏粒子(最終稀釋倍數(shù)1：40)的反應(yīng)圖像判定為(-)且致敏粒子(最終稀釋

倍數(shù)1：80)的反應(yīng)圖像判定為(±)時(shí)，最終判定為保留。

注)：通過(guò)本試劑判定為抗體陽(yáng)性或保留時(shí)，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間再進(jìn)行檢查要進(jìn)行經(jīng)時(shí)檢查并與其他的檢查結(jié)果和臨床癥狀結(jié)合起來(lái)加以綜合判斷。

[檢驗(yàn)方法的局限性]

1．由于抗原，抗體反應(yīng)的血清學(xué)試驗(yàn)方法的檢測(cè)靈敏度具有一定的局限性，所以本試劑檢測(cè)結(jié)果只能提示血清或血漿中有無(wú)TP抗體存在，而不能作為臨床診斷的標(biāo)準(zhǔn)。

2．抗體測(cè)試陰性的樣品并不能排除梅毒感染的可能。

[產(chǎn)品性能指標(biāo)]

1．特異性試驗(yàn)

   自存標(biāo)準(zhǔn)樣品按規(guī)定進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)樣品的抗體效價(jià)相對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)值在±1管以?xún)?nèi)，陰性標(biāo)準(zhǔn)樣品在1：80（最終稀釋倍數(shù)) 下不會(huì)顯示凝集圖像。

2．靈敏度試驗(yàn)

 試劑盒中帶有的陽(yáng)性對(duì)照血清按規(guī)定進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)抗體效價(jià)相對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)值(最終稀釋倍數(shù)1：320)在±1管以?xún)?nèi)。

3．重復(fù)性試驗(yàn)

 對(duì)同一樣品(最終稀釋倍數(shù)1：160以上) 重復(fù)進(jìn)行5次測(cè)定，各抗體效價(jià)最大頻數(shù)在±1管以?xún)?nèi)。

4．相關(guān)性

取樣品391例，研究它們和對(duì)照品(間接紅細(xì)胞凝集反應(yīng))的一致率，結(jié)果如下所示。

樣本例數(shù)           n=391例

±1管以?xún)?nèi)一致率    100％