諾如病毒抗原快速檢測(cè)試劑卡（免疫層析法）說(shuō)明書(shū)

【包裝規(guī)格】

20 測(cè)試/盒

【預(yù)期用途】

用于體外診斷。諾如病毒抗原快速檢測(cè)試劑卡（免疫層析法）是用免疫層析的方法快速定性

測(cè)定人糞便樣本中，基因1型（GGI）和基因2型（GGII）的諾如病毒。該試劑可以協(xié)助診斷胃腸

炎，分析有疑似諾如病毒胃腸炎癥狀的兒童和成人的糞便樣本。

【檢驗(yàn)原理】

（免疫層析法）為快速、多步法側(cè)流免疫層析檢測(cè)，應(yīng)用了抗

諾如病毒抗原的單克隆抗體。在加樣孔旁的反應(yīng)窗內(nèi)，有兩條包被了固定抗體的平行線。檢測(cè)線（T）包含了抗諾如病毒抗原的抗體。質(zhì)控線C包含了抗鼠IgG的抗體。酶標(biāo)記物1包含了生物素化的抗諾如病毒抗原的抗體，酶標(biāo)記物2是由結(jié)合了辣根過(guò)氧化物酶的鏈霉菌抗生物素蛋白組成。檢測(cè)過(guò)程中，先從已經(jīng)準(zhǔn)備好的糞便樣本懸濁液中，吸取一定量的上清液，與一定量的酶標(biāo)記物1混合，加入檢測(cè)卡較小的窗口中（加樣孔）。經(jīng)過(guò)室溫下10 分鐘的孵育后，樣本和酶標(biāo)記物混合液被檢測(cè)膜吸收，并在過(guò)濾片上移動(dòng)。在這個(gè)過(guò)程中，諾如病毒陽(yáng)性標(biāo)本中的抗原-酶標(biāo)記物復(fù)合物，與檢測(cè)線上固定的抗諾如病毒抗體結(jié)合，沒(méi)有結(jié)合抗原的生物素化的抗體則結(jié)合在質(zhì)控線上。之后加入酶標(biāo)記物2，在室溫下孵育1 分鐘，結(jié)合了過(guò)氧化物酶的鏈霉菌抗生物素，與通過(guò)特異性抗體而固定在膜上的生物素結(jié)合。

在反應(yīng)窗加入洗液，洗掉沒(méi)有結(jié)合的過(guò)氧化物酶。如果測(cè)試為諾如病毒陽(yáng)性，加入底物后三

分鐘，在檢測(cè)線（T）上就會(huì)出現(xiàn)藍(lán)線，同時(shí)質(zhì)控線（C）上也會(huì)出現(xiàn)藍(lán)線。如果質(zhì)控線沒(méi)有變藍(lán)，說(shuō)明這次檢測(cè)的操作存在問(wèn)題，結(jié)果不可以用于診斷。

【主要組成成分】

試劑盒內(nèi)的試劑足夠進(jìn)行20次檢測(cè)

測(cè)試卡 Cassette 20次檢測(cè) 內(nèi)裝20個(gè)獨(dú)立包裝的測(cè)試卡

稀釋緩沖液 Diluent 30 ml 樣本稀釋緩沖液，氯化鈉蛋白緩沖液，含0.1% Kathon CG;

開(kāi)瓶即用，藍(lán)色洗液 Wash 10ml 洗液，磷酸化的氯化鈉，含0.1% Thimerosal，開(kāi)瓶即用

酶標(biāo)記物1 Conjugate│1 7ml 穩(wěn)定蛋白溶液中的生物素標(biāo)記的抗諾如病毒抗體，開(kāi)瓶即用，

酶標(biāo)記物2 Conjugate│2 5ml 穩(wěn)定蛋白溶液中的鏈霉菌過(guò)氧化物酶，開(kāi)瓶即用

底物 Substrate 7ml 過(guò)氧化氫/TMB，開(kāi)瓶即用吸液管 Pipet 25支 每包中裝有25支有刻度標(biāo)記的一次性塑料吸樣管

【儲(chǔ)存條件及有效期】

2－8 °C保存，必須在有效期前使用。過(guò)有效期之后，產(chǎn)品的質(zhì)量保證不再有效。同樣，如果檢測(cè)卡的外殼破損將會(huì)使檢測(cè)卡潮濕，我們將不能保證檢測(cè)卡適合使用。

有效期：6個(gè)月

【樣本要求】

糞便樣本必須使用沒(méi)有任何添加劑的干凈容器收集，試驗(yàn)前儲(chǔ)存于溫度應(yīng)為2-8 °C。在病人癥狀出現(xiàn)后（腹瀉和嘔吐），應(yīng)盡快進(jìn)行樣本采集，因?yàn)榘Y狀出現(xiàn)后1-3 天，病毒的清除達(dá)到zui大化。如果標(biāo)本保存時(shí)間超過(guò)3 天，必須儲(chǔ)存于-20 °C。在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，冷凍的樣本必須充分解凍，回復(fù)至室溫。與新鮮樣本一樣，復(fù)溫的樣本也必須在檢測(cè)前，和試劑充混合。應(yīng)避免樣本多次凍融。

采用直腸拭子采集樣本時(shí)，必須得到足夠的糞便樣本（大約100 mg）以確保檢測(cè)進(jìn)行。

【檢測(cè)方法】

1.常規(guī)信息

檢測(cè)前，樣本、稀釋緩沖液、試劑和檢測(cè)卡必須恢復(fù)至室溫（20 - 25 °C）。檢測(cè)卡必須在即將使用前才可以從外包裝中取出，檢測(cè)卡一旦從外包裝中取出或被使用，則不可以再次使用。檢測(cè)不可以在陽(yáng)光直射下進(jìn)行。

2.準(zhǔn)備樣本懸濁液

取1 ml樣本稀釋緩沖液Diluent 加入貼好標(biāo)簽的試管內(nèi)。對(duì)于液態(tài)糞便樣本，可用盒內(nèi)的一次性吸液管Pipet 吸取100 μl樣本（至吸液管的第二個(gè)增粗處），懸空滴加于事先已加入提取緩沖液的標(biāo)記試管中；對(duì)于固態(tài)糞便樣本，取50-100mg樣本（豌豆大?。┘尤刖彌_液中。樣本必須被混勻，可利用試管反復(fù)吸放，或者用漩渦混勻器將糞便懸浮液混勻。至少沉淀2分鐘后，取200- 500 μl上清液置于另一干凈試管中（或者未包被的微孔中）。

3.將檢測(cè)卡Cassette從外包裝中取出，將其放置在水平的墊子上。

4.用已經(jīng)處理過(guò)同一樣本的一次性吸管，從糞便懸濁液中吸取250 μl上清液（*個(gè)標(biāo)記處），

加入干凈的、標(biāo)記的試管中。

5.在試管中加入6 滴酶標(biāo)記物1 Conjugate│1（滴加時(shí)保持小瓶垂直）。

6.通過(guò)吸放的方式將混合液*混勻后，用一次性吸管將其全部吸出，以緩慢平穩(wěn)連貫的水流，注入檢測(cè)卡的加樣孔中。將吸管傾斜約 45°}，管口指向反應(yīng)窗，這樣混合物就可以全部流至反應(yīng)窗內(nèi)。__

7.將檢測(cè)卡在室溫下（20 - 25 °C）孵育10 分鐘。確保反應(yīng)窗的檢測(cè)膜已被樣本混合液充分浸濕，否則請(qǐng)將100 μl 稀釋緩沖液滴入加樣孔中。

8.在反應(yīng)窗中加入4 滴酶標(biāo)記物2 Conjugate│2（滴加時(shí)保持小瓶垂直），再于室溫下孵育至少1分鐘。

9.在反應(yīng)窗中，加入10滴洗液 Wash，待洗液被*吸收后，再進(jìn)行后續(xù)操作。

10.在反應(yīng)窗中加入6 滴底物 Substrate（滴加時(shí)保持小瓶垂直）。

11.之后的3分鐘內(nèi)，讀出檢測(cè)結(jié)果。在3分鐘后出現(xiàn)的有色條帶，沒(méi)有診斷意義

【參考值（參考范圍）及檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

1. 在加入底物后3 分鐘之內(nèi)，在良好采光直視下讀出的檢測(cè)結(jié)果，是zui可靠的。

2. 查看在反應(yīng)窗的“C"標(biāo)記處，是否有出現(xiàn)藍(lán)色的條帶（所謂的內(nèi)部質(zhì)控線），在反應(yīng)窗的“T"標(biāo)記處是否出現(xiàn)藍(lán)色的條帶（所謂的檢測(cè)線）。顏色的強(qiáng)度可能會(huì)由淺變深。

3. 陽(yáng)性結(jié)果：加入底物之后3 分鐘內(nèi)，如果同時(shí)出現(xiàn)兩條藍(lán)色的條帶（檢測(cè)線“T"和質(zhì)控線“C"），可判別為陽(yáng)性結(jié)果。顏色可由淺變深。如果條帶只有部分清晰出現(xiàn)，也可以解釋為陽(yáng)性。膜的其他顏色改變或其他部位的陰影，都不能解釋為陽(yáng)性結(jié)果。

4. 陰性結(jié)果：加入底物的3 分鐘后，就可以開(kāi)始判別是否為陰性結(jié)果或無(wú)效結(jié)果了。如果只在反應(yīng)窗的質(zhì)控帶“C"處出現(xiàn)藍(lán)色的條帶，在檢測(cè)帶“T"處沒(méi)有藍(lán)色條帶出現(xiàn)，則可判定為陰性結(jié)果。陰性結(jié)果說(shuō)明，在樣本中沒(méi)有諾如病毒的抗原存在，或抗原的量低于檢測(cè)限。

5. 無(wú)效結(jié)果：在反應(yīng)窗的檢測(cè)帶“T"和質(zhì)控帶“C"處，均無(wú)藍(lán)色條帶出現(xiàn)，或者只在檢測(cè)帶

“T"出現(xiàn)條帶，這兩種情況均說(shuō)明檢測(cè)無(wú)效，需要用新的檢測(cè)卡重新進(jìn)行檢測(cè)。

諾如病毒抗原快速檢測(cè)卡（免疫層析法）檢測(cè)結(jié)果的解釋：

【檢驗(yàn)方法的局限性】

（免疫層析法）用于檢測(cè)基因1 型和基因2 型的諾如病毒，如

果病毒量沒(méi)有低于試劑的檢測(cè)限，則可以檢測(cè)該種病毒是否在糞便樣本中出現(xiàn)。糞便樣本是否取樣于胃腸炎病人的癥狀表現(xiàn)期，對(duì)結(jié)果的影響是非常重要的。檢測(cè)中出現(xiàn)藍(lán)色條帶的顏色強(qiáng)度，不能反應(yīng)臨床癥狀的嚴(yán)重程度，只能提示糞便樣本中的病毒抗原量。條帶的藍(lán)色可以從很淺的顏色變?yōu)楹苌畹念伾?/p>

陽(yáng)性結(jié)果不能排除存在其他病原體感染。在樣本中可能同時(shí)存在兩種及以上的病原體，需要

進(jìn)行鑒別的檢測(cè)以確診。雙重或多重感染的癥狀會(huì)比一種感染引起的癥狀嚴(yán)重。

陰性結(jié)果不能排除諾如病毒的存在或諾如病毒是引發(fā)胃腸炎的原因。此種情況可因以下原

因發(fā)生：間歇性病毒排出、或者糞便樣本中病毒含量過(guò)低，樣本采集時(shí)間不當(dāng)，運(yùn)輸或儲(chǔ)存條件

不適合。如果病人高度懷疑病原體感染，應(yīng)再重新留便復(fù)查。

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

在驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中，用（免疫層析法）檢測(cè)113 例糞便樣本。樣本

從胃腸炎患者的糞便中采集，既有散發(fā)病例，也有爆發(fā)病例。樣本收集于2007-2008 年的冬季，在德國(guó)漢堡的城市地區(qū)采集。在當(dāng)?shù)氐男l(wèi)生研究所，用RT-PCR 的方法檢測(cè)新鮮的樣本后，將樣本凍存。2008 年7 月，將冰凍的樣本融化后，在與之前相同的實(shí)驗(yàn)室，用（免疫層析法）和已上市的諾如病毒抗原檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法），同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。

【注意事項(xiàng)】

1. 僅用于體外診斷。

2. 實(shí)驗(yàn)必須由經(jīng)過(guò)專業(yè)培訓(xùn)的人員操作。必須嚴(yán)格按照醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的規(guī)章制度操作。

3. 產(chǎn)品操作時(shí)必須嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作。

4. 樣品稀釋緩沖液中含有Kathon CG 作為防腐劑，此物質(zhì)不能接觸皮膚或粘膜。

5. 樣本和試劑不可以用嘴吸取。

6. 樣本和試劑避免接觸受傷的皮膚或者粘膜。

7. 處理樣本時(shí)應(yīng)該戴一次性手套，完成試驗(yàn)后要洗手。

8. 禁止在樣本和試劑實(shí)驗(yàn)區(qū)域內(nèi)吸煙、吃東西或喝水。

9. 所有試劑和材料如果接觸有潛在感染性的樣本，應(yīng)與樣本一樣，立即用適當(dāng)?shù)南緞ㄈ纾?/p>

次氯酸鈉）或者高壓高溫121℃至少1 小時(shí)處理。

10. （免疫層析法）必須在效期內(nèi)使用。所有的試劑都被調(diào)整

為zui適宜的活性狀態(tài)。稀釋或改變這些試劑將減少其活性。如果不按照說(shuō)明中的時(shí)

間和溫度進(jìn)行操作，將會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

11. 不同批號(hào)的（免疫層析法）試劑盒中的試劑不可以混用。

12. 試劑和樣本必須避免微生物的污染，否則將會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。

13. 吸取每個(gè)樣本時(shí)，必須使用不同的吸管，以防止交叉污染及錯(cuò)誤結(jié)果

14. 每個(gè)檢測(cè)卡只可使用一次

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