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森林腦炎抗體檢測試劑盒

森林腦炎抗體檢測試劑盒

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森林腦炎抗體檢測試劑盒

  • 產品描述

森林腦炎(蜱傳腦炎)IgM檢測試劑盒(ELISA)說明書

中國地區(qū)總代理及售后服務商:廣州健侖生物科技有限公司

【預期用途】

本試劑盒可用于定量檢測人血清血漿和腦脊髓液中的抗腦炎病毒(TEBV)的IgG抗體,從而控制體液免疫狀態(tài)和確定疫苗接種后的血清轉化。鑒別明顯的和潛在的腦炎病毒的感染,通常附帶著抗腦炎病毒的IgM的檢測。

【臨床背景】

在歐洲,森林腦炎和萊姆病是zui為常見的蜱媒傳染病。萊姆病分布非常廣泛,但森林腦炎只存在于一些特殊的地方(德國南部、圖林根州、奧地利、瑞士、匈牙利、瑞典、捷克、斯洛伐克共和國、克羅地亞、斯洛文尼亞以及一些前蘇聯地區(qū)等。)。

這兩種病的感染都跟它們的發(fā)育類似,包含兩個或兩個以上的階段。森林腦炎的病毒血癥階段含有3~14天的孵育階段,在此階段的初期(1-8天) 會出現類似流行性感冒的癥狀。在大概一周沒發(fā)熱的間隔后,感染進入第二階段,以神經系統(tǒng)方面的癥狀強度的改變?yōu)樘卣鳎@種階段可能持續(xù)幾周時間。

在疾病第二階段的初期,通??梢詸z測到抗森林腦炎的IgM抗體??贵w水平在2~6周后達到峰值??贵w水平要降低到可檢測以下可能需要10個月時 間。抗森林腦炎的IgG抗體在IgM抗體出現的同時或者之后幾天內即可檢測到。感染意味著出現通常能維持一生的免疫力。接種疫苗也能預防疾病。

腦脊髓液中的森林腦炎特異性抗體可能是在對森林腦炎抗原進行免疫應答時或者之前由血腦屏障的功能紊亂引起的,又或者是局部的免疫應答引起的。所以,腦脊髓液中抗體水平的波動可能跟這些一般在血清或血漿中的抗體水平不一樣。

由于添加了RF/IgG吸附劑所以RF因子和特異性IgG不會干涉IgM的檢測。這兩種檢測系統(tǒng)的結合可以用于森林腦炎疫苗接種后的體液免疫隨訪或者感染,早期的森林腦炎感染和監(jiān)測人血清、血漿和腦脊髓液中的抗體水平。

【檢測原理】

本試劑盒使用的是兩步法ELISA。微孔中包被了失活的森林腦炎病毒。稀釋后的血清、血漿或者腦脊髓液樣本在微孔中孵育。孵育期間,森林腦炎特 異性抗體會跟森林腦炎病毒相集合,未結合的部分通過洗板洗去。加入酶聯物進行孵育,HRP標記的抗人IgG抗體會跟人IgG抗體特異性結合。加入底物液后 顏色轉變成藍色,孵育一段時間后加入終止液終止反應,顏色從藍色轉換成黃色,zui后在酶標儀上讀數。

【儲存和穩(wěn)定性】

此試劑盒在室溫發(fā)貨,儲存在2 – 8℃。避免高溫或太陽光直射。樣本和準備好的試劑的儲存和穩(wěn)定性在相應的章節(jié)都有闡明。包被板條在有效期內都能保持穩(wěn)定,儲存在2 – 8℃下時應和干燥劑一起密封在小袋中。

【樣本采集和儲存】

血清、血漿或者腦脊髓液

遵守靜脈穿刺的一般規(guī)定,從收集到實驗期間,保存樣本化學性質的完整是非常重要的,

注意不要使用溶血的、脂血、黃疸的樣本,樣本出現渾濁應該在實驗前離心并去除所有的微粒物質。

儲存

2~8℃

≤-20℃(小瓶分裝)

避免高溫和陽光直射,避免反復凍融

穩(wěn)定性

5d

12個月

【試劑組成】

數量

標識

組分

1×12×8

MTP

包被板

即用,可拆分,包被了已滅活的TBE病毒

2×75mL

DILBUF

稀釋緩沖液

即用,紅色

1×0.6mL

ENZCONJ CONC

酶聯物

藍色,酶標記的抗人IgG抗體

5×0.35mL

CAL 1-5

濃縮校準品

含人血清,穩(wěn)定劑,防腐劑

濃縮的倍數以不同的批號而不同,具體請參照瓶上的標簽

2×0.35mL

Control LL

Control HL

質控LL+HL 濃縮

陽性質控血清,LL“低水平”HL“高水平”

含:人血清,穩(wěn)定劑,防腐劑。

濃縮的倍數以不同的批號而不同,具體請參照瓶上的標簽

1×100mL

WASHBUF

CONC

洗滌液,10倍濃縮

含磷酸鹽緩沖液

2×12mL

TMB SUBS

TMB底物液

即用,含TMB

1×12mL

TMB STOP

TMB終止液

即用,含0.5M 硫酸

FOIL

封板片

【試驗需要但試劑盒不提供的設備】

1.         一次性使用的5;25;50;100;500μl加樣槍頭

2.         漩渦混勻器

3.         樣品稀釋管

4.         軌道振蕩器(200-900rpm)

5.         8道微量移液器和加樣槽。

6.         洗瓶,自動化或半自動化的洗板機

7.         450nm的酶標儀

8.         雙蒸水或去離子水

9.         紙巾,移液管,計時器

【實驗前準備】

1.       濃縮試劑的準備(用于32孔的例子)

稀釋/溶解

組分

加入稀釋液的量

稀釋液

比例

附注

儲存

穩(wěn)定性

80μL

ENZCONJ CONC

8mL

DILBUF

1:101

仔細混勻

18-25℃

1小時

10mL

WASHBUF

CONC

90mL

蒸餾水

1:10

仔細混勻

2-8℃

2個月

2.       標準品、質控品和樣本的稀釋

 

稀釋方法

稀釋液

稀釋比例

備注

CAL 1-5

Control LL

Control HL

常規(guī)稀釋

DILBUF

1:101

例子:10μL 校準品/質控品+1000μL

血清、血漿

常規(guī)稀釋

DILBUF

1:101

例子:10μL樣本+1000μL

腦脊髓液

常規(guī)稀釋

DILBUF

1:9

例子:50μL樣本+400μL

用于標準曲線方法需要1~5校準品和指控血清;樣本所含的濃度如果高于zui高校準品濃度需要進一步稀釋。用于一點標定法則只需要校準品4和質控血清即可。

【實驗步驟】

1.       將200μL已稀釋的校準品、質控品和樣本加到相應的微孔中。

2.       用封板片封板,室溫下(18-25℃)孵育1小時

3.       揭去封板片,棄去反應液,用稀釋后的洗滌液洗板3次(250μL/孔/次),zui后通過拍板拍去殘留的液體

4.       將200μL已稀釋的酶聯物加到每個孔中

5.       用封板片封板,在室溫下(18-25℃)孵育1小時

6.       重復步驟3

7.       將200μL  TMB底物液加到每個孔中

8.       室溫(18-25℃)孵育30分鐘

9.       按加TMB底物液的順序,將50μL的終止液加到每個孔中,輕輕混勻

10.   在加入終止液后10分鐘內,用酶標儀在450nm±10nm處讀數。

【結果的計算】

1.       標準曲線方法

在半對數紙上(或者使用自動化儀器)以每個標準品的OD值為Y軸,相應的濃度為X軸做出標準曲線,推薦使用4參數邏輯函數(Y=d+(a-b)/(1+(x/c)b))。

樣本的濃度應當直接從標準曲線中讀取,如果有稀釋,則在計算中應該乘以稀釋倍數,如果樣本的濃度過高,則需要按照實驗前設置說明稀釋樣本。

2.       一點標定法

(1)       樣本濃度的手冊檢測

需要使用用校準品4、質控血清和樣本各自的平均OD值。校準品4的OD必須要在的范圍內(見一點標定法評估表)。每次檢測都必須計算檢測特殊的校正因子。校準品4的理論OD值都是按特定批次檢測得出的(見一點標定法評估表)。將質控血清和樣本的OD乘以校正因子:

質控血清和樣本濃度可以從批次參考曲線中讀出。

例子:

校準品4的理論OD值                  OD=1.377

校準品4的檢測OD值                  OD=1.273

校正因子F                             F=1.082

樣本的檢測OD值                      OD=0.937

樣本的校正OD值                      OD=1.014

讀取濃度                         0.5VIEU/mL

(2)       腦脊髓液樣本濃度的計算(一點標定法軟件)

打開名為“One Point Calibration TBE IgG Liquor”的Excel文件,將QC證書的下列指標填到Excel中:

校準品4的理論OD值

校準品4的OD范圍

臨界1和臨界2的理論OD值

臨界1 OD=灰區(qū)的zui低點

臨界2 OD=灰區(qū)的zui高點

填入檢測到的校準品4平均OD,將腦脊髓液樣本的鑒別和OD插入到已準備好的計算單中。腦脊髓液樣本的求值和OD都會自動完成。

【結果的判定】

血清/血漿

<63VIEU/mL         陰性

63-126VIEU/mL       灰區(qū)

>126VIEU/mL        陽性

腦脊髓液

OD<臨界1理論OD                      陰性

臨界1理論OD<OD<臨界2理論OD       灰區(qū)

OD>臨界2理論OD                      陽性

【結果的說明】

1.       疫苗

通過檢測血清血漿中的抗TBE的IgG抗體來證明血清轉化

(1)       抗TBE IgG陰性

接種疫苗后無血清轉化

(2)       抗TBE IgG 灰區(qū)

可能有血清轉化,建議在2~4周內再次檢測

(3)       抗TBE IgG陽性

接種疫苗后有血清轉化

2.       感染

(1)       抗TBE IgM和抗TBE IgG 陰性    

無感染

(2)       抗TBE IgM陰性和TBE IgG 陽性  

這可能是潛在的免疫或者是幾周或幾月之前的感染

(3)       抗TBE IgM陽性和TBE IgG陰性

可能有新近感染

(4)       抗TBE IgM和抗TBE IgG都陽性

有感染

本譯文由廣州健侖生物科技有限公司技術人員編譯,僅供參考,詳情請與我們。

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----------------------健侖知識------------------------
森林腦炎(forest encephalitis)又名蜱傳腦炎(tickborne encephalitis)是由病毒所致的一種急性傳染病。1934年5~8月間在蘇聯東部的一些森林地帶首先發(fā)現本病,故又稱蘇聯春夏腦炎。野生動物,尤其是野鼠是本病的傳染源,蜱為其傳播媒介。臨床上以突發(fā)高熱、腦膜刺激癥、意識障礙和癱瘓為其特征。腦脊液有異常變化,常有后遺癥。

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