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禽呼腸孤抗體檢測試劑盒標(biāo)準(zhǔn)

禽呼腸孤抗體檢測試劑盒標(biāo)準(zhǔn)

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禽呼腸孤病毒被認(rèn)為與病毒性關(guān)節(jié)炎、發(fā)育遲緩綜合征、呼吸系統(tǒng)疾病、腸熱病、吸收障礙綜合癥和骨質(zhì)疏松有關(guān),從未發(fā)病的雞中也可分離到呼腸孤病毒,根據(jù)宿主日齡、毒力和接觸病毒途徑的不同,病毒誘發(fā)疾病的的性質(zhì)、癥狀和嚴(yán)重程度也不同,雞血清中的禽呼腸孤病毒抗體水平及整個(gè)雞群的免疫狀況可用ELISA方法進(jìn)行監(jiān)測。
將滅活的抗原包被在微孔板上,加入稀釋后的血清并孵育。血清中的所有抗REO抗體將與微孔板上的REO抗

  • 產(chǎn)品描述

 禽呼腸孤抗體檢測試劑盒使用說明書

產(chǎn)品咨詢:

【用途】 
用來檢測雞血清中的禽呼腸孤病毒抗體

【試驗(yàn)原理】
禽呼腸孤病毒被認(rèn)為與病毒性關(guān)節(jié)炎、發(fā)育遲緩綜合征、呼吸系統(tǒng)疾病、腸熱病、吸收障礙綜合癥和骨質(zhì)疏松有關(guān),從未發(fā)病的雞中也可分離到呼腸孤病毒,根據(jù)宿主日齡、毒力和接觸病毒途徑的不同,病毒誘發(fā)疾病的的性質(zhì)、癥狀和嚴(yán)重程度也不同,雞血清中的禽呼腸孤病毒抗體水平及整個(gè)雞群的免疫狀況可用ELISA方法進(jìn)行監(jiān)測。
將滅活的抗原包被在微孔板上,加入稀釋后的血清并孵育。血清中的所有抗REO抗體將與微孔板上的REO抗原結(jié)合并形成REO抗原-抗體復(fù)合物,然后洗掉未結(jié)合的物質(zhì),加入堿性磷酸酶標(biāo)記的抗雞的IgG(結(jié)合物)至微孔板中,結(jié)合物將與REO抗原-抗體復(fù)合物結(jié)合,孵育后洗掉未結(jié)合的結(jié)合物,加入底物溶液。底物與堿性磷酸酶發(fā)生反應(yīng)形成黃色的物質(zhì)。zui后,終止反應(yīng),將顏色固定。顏色的深淺可用酶標(biāo)儀(405-410nm)測定。

【一個(gè)微孔板所需的試劑的量】

樣品平均吸光度值 - 陰性對(duì)照吸平均吸光度值

=樣品與陽性對(duì)照比值(Sp

陽性對(duì)照平均吸光度值 - 陰性對(duì)照平均吸光度值

Sp ×(100)= ELISA Unit (EU)              陽性對(duì)照值設(shè)為100 EU

【結(jié)果判定及EU單位說明】
REO ELISA                         說明
小于10EUs                            REO抗體為陰性
10-25 EUs                            REO抗體為弱陽性,應(yīng)被認(rèn)為經(jīng)過免疫或暴露于REO,油乳狀疫苗也可能引起非特異性低水平抗體。
25-75 EUs                             REO抗體適度陽性
75 EUs                              REO抗體強(qiáng)陽性

【操作步驟】
1. 將試劑回溫至室溫,通過顛倒和渦旋將試劑混勻。
2. 1樣品稀釋液加入到含3份去離子水的容器中,充分混勻,例如,30ml 4×樣品稀釋液加入到90ml去離子水中。
3. 120×洗滌液加入到含19份去離子水的容器中,充分混勻,例如,25ml 20×洗滌液加入到475ml去離子水中。
4. 稀釋前將陽性對(duì)照、陰性對(duì)照和樣品震蕩均勻。
5. 陽性對(duì)照、陰性對(duì)照和樣品均需要用樣品稀釋液稀釋后使用。稀釋比例為2μl 800μl。將移液器調(diào)到100μl,反復(fù)吹打4次使之充分混勻。
6. 將稀釋后的陰性對(duì)照、陽性對(duì)照分別加入微孔中,每種做兩個(gè)平行,每孔100μl;將稀釋后的樣品100μl分別加入孔中,室溫下靜置30分鐘。
7. 棄去微孔板中溶液,每孔加入300μl洗滌液洗滌,重復(fù)洗滌2次,在洗滌過程中防止酶標(biāo)板變干。
8. 每孔立即加入100μl結(jié)合物,室溫靜置30分鐘。
9. 重復(fù)步驟7進(jìn)行洗板。
10. 每孔立即加入100μl底物,室溫靜置30分鐘。
11. 不要倒掉板內(nèi)液體,每孔立即加入100μl終止液。
12. 用酶標(biāo)儀雙波讀數(shù)(405nm410nm作為主要波長,630nm650nm為參考波長),計(jì)算結(jié)果。

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