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西尼羅熱病IGM檢測(cè)試劑

西尼羅熱病IGM檢測(cè)試劑

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西尼羅病毒IGM檢測(cè)試劑盒

  • 產(chǎn)品描述

 西尼羅病毒IGM檢測(cè)試劑盒

僅供科研使用

用途

美國(guó)FOCUS西尼羅河(West Nile)病毒IMM ELISA,利用了西尼羅重組抗原檢測(cè)人體血清或血漿中的西尼羅抗體。本實(shí)驗(yàn)僅用于輔助診斷人感染了西尼羅病毒,不用于篩查血液或血液成分。僅供專業(yè)人員體外診斷使用。

概述

 感染了西尼羅病毒會(huì)導(dǎo)致包括腦炎等一系列癥狀的疾病,西尼羅病毒在世界廣泛傳播,已在50多個(gè)國(guó)家檢測(cè)出該病毒。本試驗(yàn)經(jīng)CDC提供的試劑檢驗(yàn)與驗(yàn)證。本試驗(yàn)使用了一種稱為WNRA的重組抗原,它可以作為西尼羅病毒感染的快速血清學(xué)指標(biāo),WNRA蛋白是一種重組抗原,它是由含有西尼羅病毒兩個(gè)抗原的序列多肽構(gòu)成。

實(shí)驗(yàn)的原理

檢測(cè)西尼羅病毒IMM ELISA 是基于兩步夾心法原理制造的。

提供的材料

1.        微孔板(96 12x8):即用  每孔均包被結(jié)合西尼羅重組抗原的單抗。28℃下保存至保質(zhì)期。

注意:WNRANCA已包被于微孔板。

2.        IMM樣品稀釋液:1 25ml 即用 2-8℃下保存至使用。

3.        IMM陰性質(zhì)控:1 30ul  2-8℃下保存至使用。要長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存,將其分裝于小瓶里,在-70℃下儲(chǔ)存。

4.        IMM陽(yáng)性質(zhì)控:1 30ul  2-8℃下保存至使用。要長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存,將其分裝于小瓶里,在-70℃下儲(chǔ)存。

5.        洗滌液(10X):1 120ml  28℃下保存至使用。

6.        EnWash1 20ml 28℃下保存至使用。

7.        酶聯(lián)物:一瓶6ml 即用 28℃下保存至使用。

8.        TMB底物液: 1 9ml 即用  28℃下保存至使用。

9.        終止液;16ml 即用  28℃下保存至使用。

試劑應(yīng)避免反復(fù)凍融。

操作步驟

在使用前將所有試劑和樣品平衡至室溫,并輕輕倒轉(zhuǎn)使其充分混勻。

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備:

10X的濃縮洗滌液稀釋,120ml的濃縮洗滌液加上1080ml的蒸餾水,搖勻,至無(wú)任何沉淀,稀釋好的洗滌液zui多可在室溫下放置兩個(gè)星期。

準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)所需的板條,剩余的板條應(yīng)盡快放入袋子里重新密封,在28℃下儲(chǔ)存至保質(zhì)期。

操作步驟

1.     標(biāo)記將要使用的板條,注意微孔板已經(jīng)按照統(tǒng)一排列,如下所述包被西尼羅抗原和質(zhì)控抗原。

西尼羅抗原

 

板條#1

板條#2

A

WNRA

WNRA

B

WNRA

WNRA

C

WNRA

WNRA

D

WNRA

WNRA

E

NCA

NCA

F

NCA

NCA

M

NCA

NCA

H

NCA

NCA

2.     將血清樣品﹑陰性質(zhì)控和陽(yáng)性質(zhì)控同樣地用樣品稀釋液按1300稀釋。

3.       每孔加入50ul稀釋后的樣品,以下為一個(gè)血清樣品使用一個(gè)板條的*。

 

 

板條1

板條2

血清樣品

A

IMM N

樣品1

B

IMM N

樣品1

C

IMM P

樣品2

D

IMM P

樣品2

E

IMM P

樣品2

F

IMM P

樣品2

M

IMM N

樣品1

H

IMM N

樣品1

       

4.       封板,在濕潤(rùn)的溫育器里37下溫育1小時(shí)。

5.       溫育后,用自動(dòng)洗板機(jī),使用洗滌液洗板6次。

6.       在每孔中加入50ul的酶聯(lián)物。

7.       封板,在濕潤(rùn)的溫育器里37下溫育1小時(shí)。

8.       溫育后,用自動(dòng)洗板機(jī),使用洗滌液洗板6次。

9.       每孔加入150ulEnWash,在室溫下溫育5分鐘

10.   溫育后,用自動(dòng)洗板機(jī),使用洗滌液洗板6次。

11.   每孔加入75ulTMB底物液。

12.   封板,在室溫下,避光處溫育10分鐘。

13.   每孔加入50ul的終止液終止反應(yīng)。

14.   450nm處讀取吸光率。

結(jié)果的計(jì)算

結(jié)果的變化將會(huì)非常大,以下結(jié)果僅供指引。

計(jì)算ISR值:

計(jì)算在同一實(shí)驗(yàn)里WNR抗原的兩個(gè)陰性質(zhì)控的平均值,計(jì)算同一實(shí)驗(yàn)里NC抗原的兩個(gè)陰性質(zhì)控的平均值,用WNRA/NCA,得出陰性質(zhì)控的ISR值。同樣地計(jì)算陽(yáng)性質(zhì)控和樣品得ISR值,陽(yáng)性質(zhì)控的ISR值應(yīng)高于3.0,陰性質(zhì)控的ISR值應(yīng)低于1.5。

ISR

結(jié)果

解釋

2.0

陰性

沒(méi)有檢測(cè)到IMM抗體

2.03.0

可疑

需確證實(shí)驗(yàn)

3.0

陽(yáng)性

存在IMM抗體,建議做確定性實(shí)驗(yàn)

結(jié)果的判斷:

 

 

 

 

 

在某些特殊的例子中,曾報(bào)道有假陽(yáng)性,但對(duì)梅毒病人無(wú)限制。假如樣品的ISR值大于2.0,但是WNRANCAOD值均偏低,可視為潛在假陽(yáng)性。以下為樣品1排除標(biāo)準(zhǔn)的范例。

排除標(biāo)準(zhǔn):

計(jì)算陰性質(zhì)控的WNRANCA值:

 

WNRA

NCA

0.153

0.126

NO.2

0.125

0.110

總計(jì)

0.260

0.236

平均WNRA=0.260/2=0.130

     NCA=0.236/2=0.118

     ISR=0.130/0.118=1.10

任何陰性質(zhì)控的ISR值高于1.5,則實(shí)驗(yàn)需要重做。

計(jì)算陽(yáng)性質(zhì)控的WNRANCA值:

 

WNRA

NCA

0.635

0.190

NO.2

0.655

0.178

總計(jì)

1.290

0.368

平均WNRA=1.290/2=0.645

     NCA=0.368/2=0.184

     ISR=0.645/0.184=3.5

任何陽(yáng)性質(zhì)控的ISR值低于3.0,則實(shí)驗(yàn)需要重做。

以下標(biāo)準(zhǔn)是必需遵守的,不滿足以下標(biāo)準(zhǔn),試劑出現(xiàn)了質(zhì)量問(wèn)題或操作錯(cuò)誤,實(shí)驗(yàn)需重做。

因素

范圍

平均陰性質(zhì)控讀數(shù)

0.400

平均陽(yáng)性質(zhì)控讀數(shù)

0.400

陽(yáng)性質(zhì)控的ISR

3.000

陰性質(zhì)控的ISR

1.500

解釋結(jié)果

1.       樣品的ISR值大于3.0視為陽(yáng)性。

2.       陽(yáng)性結(jié)果需重做證明。

3.       樣品的ISR值小于2.0視為陰性。

4.       樣品的ISR值小于3.0但是大于2.0,視為未確定,但是很有可能陽(yáng)性,實(shí)驗(yàn)需一式三份重做。

5.       ISR值大于2.0是因?yàn)?/span>WNRANCA的值都低造成的,應(yīng)該視為潛在假陽(yáng)性。

樣品1OD值的范例:
計(jì)算樣品的WNRANCA值:

 

WNRA

NCA

0.044

0.190

NO.2

0.016

0.007

總計(jì)

0.060

0.026

平均WNRA=0.060/2=0.030

     NCA=0.026/2=0.013

     ISR=0.030/0.013=2.31

雖然樣品的ISR值高于2.0,但是本樣品需視為假陽(yáng)性,因?yàn)槠?/span>OD值低,而且遠(yuǎn)遠(yuǎn)偏離了相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)品,這通常在空白值高的情況下發(fā)生。

要進(jìn)一步證實(shí)樣品,所有陽(yáng)性的結(jié)果都要用6,2層析稀釋滴定法重做,與相同滴定法的陰性質(zhì)控相比較,假如曲線是??的,平的或者是波浪型的曲線,則表明為假陽(yáng)性的結(jié)果。

實(shí)驗(yàn)的局限性

1.           樣品的OD值高于抗原質(zhì)控(非WNRA,導(dǎo)致ISR值小于3.0,則可能為假陰性,再釋稀樣品重新實(shí)驗(yàn),可能會(huì)獲得真正的ISR值。

2.          既然這不是一個(gè)直接檢測(cè)的方法,則需考慮假陽(yáng)性和假陰性存在的可能性。

3.          所有有反應(yīng)的樣品,應(yīng)用確定性實(shí)驗(yàn)來(lái)證實(shí)。

4.          本實(shí)驗(yàn)提供的試劑,盡可能地檢測(cè)血清或血漿中的WNRA反應(yīng)性抗體水平。

5.          應(yīng)避免反復(fù)凍融樣品和試劑。

6.          不要使用溶血或脂血的樣品,它們會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

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該說(shuō)明書由健侖生物技術(shù)人員編譯,請(qǐng)與英文原文為準(zhǔn),謝謝!

 

 

 

 

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