登革熱試劑盒是用來定性檢測人血清、血漿和全血中的登革熱病毒IgM和IgG抗體的方法。這方法能用來鑒別初次和二次感染。它僅能用來檢測具有臨床登革熱癥狀的病人的樣本。
登革熱是登革病毒經(jīng)蚊媒傳播引起的急性蟲媒傳染病。臨床表現(xiàn)為高熱、頭痛、肌肉、骨關(guān)節(jié)劇烈酸痛、皮疹、出血傾向、淋巴結(jié)腫大、白細(xì)胞計(jì)數(shù)減少、血小板減少等。是東南亞地區(qū)兒童死亡的主要原因之一。
登革熱試劑盒在處理病人樣本時(shí),登革熱特異性IgM和IgG抗體和包埋在橫過盒膜的兩條線上的抗-人IgM和IgG抗體相結(jié)合。膠態(tài)金復(fù)合物包含重組登革熱1~4型抗原被病人的IgM和IgG捕獲而顯現(xiàn)出粉紅色的線。設(shè)定一個(gè)對照程序來指示方法操作正確。結(jié)果是假定陽性的,必須經(jīng)病毒分離、雙份血清分析、免疫組織化學(xué)檢測抗原或病毒核酸檢測證實(shí)有登革熱病毒感染。
登革熱檢測方法:
實(shí)驗(yàn)開始之前仔細(xì)閱讀操作步驟,嚴(yán)格遵守操作步驟才可以獲得可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。如果這實(shí)驗(yàn)是在ELISA自動(dòng)系統(tǒng)上進(jìn)行,為了避免洗板的影響,建議在洗板步驟時(shí),洗板3次改成洗板5次,洗滌液從300µl增加到350µl。實(shí)驗(yàn)開始之前,應(yīng)當(dāng)在試劑盒提供的結(jié)果單上標(biāo)記好所有的樣品和質(zhì)控品。取適當(dāng)數(shù)量的板條置于板架上。
請至少做以下幾個(gè)孔:
1孔(例A1)做空白對照孔;
1孔(例B1)做陰性質(zhì)控;
2孔(例C1+D1)做臨界質(zhì)控;
1孔(例E1)做陽性質(zhì)控。
建議將質(zhì)控和病人樣品做雙份檢測。照說登革熱試劑盒明書給出的實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行操作,并避免不同步驟之間的時(shí)間隔無明顯差別。加每一質(zhì)控品和樣品時(shí)都應(yīng)當(dāng)用新的取樣吸頭。把恒溫箱調(diào)至37±1℃。